簡要描述:
蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)測試盒是雙向反應酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代謝的關鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。
更新時間:2024-09-02;廠商性質:經銷商;覽量:1365
商品詳情:
蔗糖合成酶(分解方向 SSⅠ)測試盒測定意義
蔗糖是源(葉片等)光合產物向“庫"器官運輸的主要形態。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13)是雙向反應酶,既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,是蔗糖代謝的關鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。
貨號 | 規格 | 檢測方法 |
YSH3520 | 100管/48樣 | 微量法 |
YSH3520-1 | 50管/24樣 | 可見分光光度法 |
測定原理
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰
樣品中AA提取:
1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。
2.細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3.血清等液體:直接檢測。
計算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。
注意事項:
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。
2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。
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